【酵母双杂交技术的原理】酵母双杂交技术（Yeast Two-Hybrid, Y2H）是一种用于研究蛋白质相互作用的分子生物学方法，广泛应用于功能基因组学和蛋白质组学研究中。该技术基于真核生物细胞内转录因子的结构特点，通过构建融合蛋白来检测两种蛋白质是否在细胞内发生相互作用。
该技术的核心原理是利用两个不同的DNA结合域（BD）和转录激活域（AD）分别与目标蛋白融合，当这两个蛋白在细胞内相互作用时，BD与AD会靠近并形成有活性的转录因子，从而激活报告基因的表达。通过观察报告基因的表达情况，可以判断两种蛋白之间是否存在相互作用。
酵母双杂交技术原理总结表
| 项目 | 内容说明 |
| 技术名称 | 酵母双杂交技术（Yeast Two-Hybrid, Y2H） |
| 应用领域 | 蛋白质-蛋白质相互作用研究、功能基因组学、信号通路分析等 |
| 基本原理 | 利用转录因子的两个结构域（BD 和 AD）分别与不同蛋白融合，若两蛋白互作，则BD与AD接近，激活报告基因 |
| 关键组件 | - DNA结合域（BD） - 转录激活域（AD） - 报告基因（如LacZ、HIS3、ADE2等） - 宿主细胞（如酿酒酵母） |
| 操作步骤 | 1. 构建诱饵蛋白（BD-蛋白） 2. 构建猎物蛋白（AD-蛋白） 3. 共转化酵母细胞 4. 筛选报告基因表达情况 |
| 优点 | - 操作简便，成本较低 - 可在活细胞中检测蛋白互作 - 适用于大规模筛选 |
| 局限性 | - 依赖于蛋白在酵母中的正确折叠和定位 - 可能出现假阳性或假阴性结果 - 不适用于膜蛋白或某些复杂蛋白复合体 |
| 常见报告系统 | - HIS3（组氨酸合成） - ADE2（腺嘌呤合成） - LacZ（β-半乳糖苷酶活性） |
酵母双杂交技术作为研究蛋白质相互作用的经典工具，在生命科学研究中具有重要价值。尽管存在一定的局限性，但通过优化实验条件和结合其他技术手段，可以有效提高其准确性和适用范围。
